亚洲熟妇无码AV在线观看,JIZZJIZZ日本高潮喷水,久久久久亚洲波多野结衣

技術(shù)文章ARTICLE

您當前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 免疫細胞轉(zhuǎn)染實操時的幾大步驟說明

免疫細胞轉(zhuǎn)染實操時的幾大步驟說明

發(fā)布時間： 2022-10-09　　點擊次數(shù)： 597次

　　對于免疫細胞轉(zhuǎn)染實驗，我們拿脂質(zhì)體為例，其作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細胞。
　　具體實操時的步驟如下：
　　1.細胞培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃二氧化碳培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。
　　2.轉(zhuǎn)染液在EP管中制備(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)：
　　A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug質(zhì)粒DNA；
　　B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
　　分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
　　3.吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
　　4.轉(zhuǎn)染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
　　5.轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃恒溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
　　6.瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。

下一篇：為什么細胞培養(yǎng)需要用到胎牛血清？

上一篇：原代細胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染操作指導(dǎo)

產(chǎn)品中心 Products

韩国日本欧美在线观看,国产日韩厂在线亚洲字幕中文,日本一区二区免费看,综合久久久久综合综合久久久

免疫細胞轉(zhuǎn)染實操時的幾大步驟說明