韩国日本欧美在线观看,国产日韩厂在线亚洲字幕中文,日本一区二区免费看,综合久久久久综合综合久久久

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法

    消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法

    發(fā)布時間: 2023-06-28  點(diǎn)擊次數(shù): 933次
    非特異性擴(kuò)增,即進(jìn)行 PCR 所擴(kuò)增出來的條帶不是所要的,引物與模板在非目的條帶處有錯配,導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體,即引物在退火過程中產(chǎn)生了 hairpin 結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu),或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合,也同樣會產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。PCR 產(chǎn)物都是通過引物延伸產(chǎn)生的。當(dāng)引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物之后,引物本身就無法再延伸形成 PCR 產(chǎn)物了,這樣的情況下,非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物越是多,那目的產(chǎn)物就越是少。如果在 qPCR 過程中,就會在熔解曲線中形成雙峰。

    消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法:
    1、引物設(shè)計(jì)的過程中要用 Primer premier 5.0 來驗(yàn)證一下二聚體;
     
    2、 引物合成后,先做一次梯度 PCR,檢測最合適的退火溫度,一般高退火溫度可以提高引 物對模板的特異性從而降低引物二聚體;
     
    3、 降低 Mg2+濃度,鎂離子濃度高,會導(dǎo)致大量的非特異性擴(kuò)增,但是沒有鎂離子的話,也會導(dǎo)致 Taq 酶的失活;
     
    4、降低 dNTP 濃度,dNTP 也是非特異性擴(kuò)增的一個罪魁禍?zhǔn)?,降低它的濃度,也能有效降低二聚體及其他非特異性擴(kuò)增;
     
    5、降低引物濃度,一般的 PCR 引物都是過量的,降低了引物濃度自然也能降低引物之間形成二級結(jié)構(gòu)的可能性;
     
    6、提高退火溫度,這個道理很簡單,引物的退火溫度提高,引物間的二級結(jié)構(gòu)形成可能性就會降低;
     
    7、延長退火時間,這個也可以減弱引物間結(jié)合的可能性;
     
    8、DMSO 及甜菜堿,這些 PCR 促進(jìn)劑,主要是用于 CG 含量高的模板上,降低 DNA 的二級結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,但根據(jù)經(jīng)驗(yàn),加入 DMSO 之后需要同時提高一點(diǎn)退火溫度來補(bǔ)平(qPCR 不太適用);
     
    9、熱啟動法,通過 95℃的高溫?zé)釂樱邷亟怄?,使得引物間的二級結(jié)構(gòu)破壞,以此降低二聚體產(chǎn)生。


    深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


產(chǎn)品中心 Products
91精品欧美综合在线观看| 久久久久久久久夜| 久久国产精品自线拍免费| 成品大香煮伊在2021一二三| 亚洲欧美日韩在线一区二区三区| 国产一三四2021不卡| 亚洲国产福利成人一区| 久久久久久久久精品国产| a一区二区三区乱码在线 | 欧洲| 欧美日韩国产一区二区精品| 欧美最猛黑人XXXX黑人猛交| 欧美狠狠入鲁的视频777色| 两个男人吮她的花蒂和奶水视频| 最近最好的中文字幕2019免费| 亚洲真人无码永久在线| 国产二区自拍| 狠狠做五月四房深爱婷婷| 国产精品久久综合亚洲| 波多野结衣一二三区AV高清| 亚洲AV成人无码久久精品老人| 国产成人精品亚洲午夜| 欧美日韩久久久免费观看| 偶偶福利电影| 人人妻人人澡人人爽不卡视频| 双乳被老汉揉搓A毛片免费观看| 日出水了好爽视频| 国产九九视频一区二区三区| 国产欧美自拍| 亚洲AV成人无码一二三| 亚洲精品国产福利在线观看| 欧美肥老太牲交视频| 午夜伦伦影院无码| 粉嫩虎白女流水白浆在线播放| 欧美日韩国产一中文字不卡| 李丽莎1分37钞视频最大尺度| 久久久精品妓女影院妓女网| 永久免费AV无码入口| 日韩 欧美 在线| 日本一区二区三区不卡在线视频| 国产欧美综合网| 久久精品免费一区二区视|